山(shan)西(xi)ATP熒(ying)光(guang)檢(jian)測(ce)儀(yi)系統(tong)原(yuan)理及部(bu)件功能解讀
山(shan)西(xi)ATP熒(ying)光(guang)檢(jian)測(ce)儀(yi)系統(tong)原(yuan)理:
螢(ying)光(guang)能合成(cheng)將(jiang)化(hua)學物質的(de)化(hua)學能轉(zhuan)變為光(guang)能的(de)生(sheng)物催化(hua)劑(ji)-熒(ying)光(guang)素(su)酶(luciferase)、蟲熒(ying)光(guang)素(su)(D-luciferin)以(yi)及(ji)所有細(xi)胞(bao)生(sheng)物都產生(sheng)的(de)生(sheng)物能量物質-三磷酸腺苷(ATP)。在有氧(yang)的(de)條(tiao)件下,蟲光素(su)酶催化(hua)蟲熒(ying)光(guang)素(su)和(he)ATP之(zhi)間(jian)發(fa)生(sheng)氧化(hua)反應(ying),形(xing)成(cheng)氧化(hua)熒(ying)光(guang)素(su)並發(fa)出(chu)熒(ying)光(guang),其(qi)生(sheng)化(hua)反應(ying)式(shi)如下:
ATP+D-Luciferin+O2 Mg++AMP+Oxyluciferin+PPi+CO2+Light Luciferase;
上(shang)式(shi)表明(ming),只(zhi)要(yao)具備適當(dang)條件(jian),不(bu)僅螢(ying)火(huo)蟲,即(ji)使(shi)在試管中(zhong)也能發(fa)出(chu)熒(ying)光(guang)。當(dang)反應(ying)系(xi)統(tong)中(zhong),蟲光素(su)酶和(he)蟲熒(ying)光(guang)素(su)處於(yu)過量的(de)情(qing)況下,熒(ying)光(guang)的(de)強弱(ruo)取(qu)決(jue)於(yu)ATP的(de)數(shu)量。以檢測(ce)含(han)細(xi)菌的(de)樣(yang)品為例(li),細(xi)菌細(xi)胞(bao)越(yue)多(duo),ATP量越(yue),發(fa)出(chu)的(de)熒(ying)光(guang)也就(jiu)越(yue)強。由(you)於(yu)蟲光素(su)酶對ATP的(de)反(fan)應非常靈敏(min),熒(ying)光(guang)強弱(ruo)可通過熒(ying)光(guang)儀(yi)10-15秒(miao)內(nei)計(ji)量。所以,在(zai)排除樣品中(zhong)非細菌ATP幹(gan)擾(rao)的(de)情(qing)況下,通過熒(ying)光(guang)值(zhi)就(jiu)能確定(ding)樣品(pin)中(zhong)細菌ATP的(de)含(han)量,從而確定(ding)細胞(bao)數(shu)量,因(yin)此(ci),此(ci)系(xi)統(tong)為半(ban)定(ding)量快速檢測(ce)系統(tong)。
山(shan)西(xi)ATP熒(ying)光(guang)檢(jian)測(ce)儀(yi)的(de)組(zu)成(cheng)部(bu)件及相關功能:
1.試劑(ji)組(zu),按(an)檢(jian)測(ce)操(cao)作(zuo)順(shun)序(xu)分(fen):
(1)體細(xi)胞(bao)裂解試劑(ji)(TRA),能專壹(yi)而有效(xiao)地裂解樣品中(zhong)的(de)非細菌細(xi)胞(bao)(體(ti)細(xi)胞(bao))並釋出(chu)ATP,然後,通過過濾(lv)比(bi)色杯底(di)部(bu)的(de)濾(lv)膜將(jiang)其(qi)排除。
(2)細菌細(xi)胞(bao)裂解試劑(ji)(XRA),能專壹(yi)而有效(xiao)地裂解樣品中(zhong)細菌細(xi)胞(bao)並釋出(chu)ATP。
(3)熒(ying)光(guang)反(fan)應(ying)試劑(ji)組(zu)(LLR),能與(yu)樣(yang)品中(zhong)的(de)細(xi)菌ATP相互作(zuo)用(yong)並有效(xiao)地發(fa)出(chu)熒(ying)光(guang)。
2.微(wei)量光度計(ji),準確計(ji)量檢樣的(de)熒(ying)光(guang)值(zhi)。
3.可供(gong)100次(ci)測(ce)定(ding)的(de)樣(yang)品預處理耗(hao)材(cai):
(1)放置(zhi)過濾(lv)比(bi)色杯的(de)杯(bei)架壹個。
(2)加壓(ya)器(qi)壹個,用(yong)於(yu)加壓(ya)、排出(chu)體細(xi)胞(bao)ATP和(he)試劑(ji)組(zu)。
(3)帶(dai)濾(lv)膜熒(ying)光(guang)反(fan)應(ying)比(bi)色杯100個(ge),為熒(ying)光(guang)反(fan)應(ying)容器。
(4)無菌吸(xi)水紙,置(zhi)於(yu)過濾(lv)比(bi)色杯架(jia),吸收(shou)加(jia)壓(ya)後流(liu)出(chu)的(de)液體。
(5)帶(dai)密(mi)封(feng)圈(quan)無(wu)菌濃(nong)縮器(qi),用(yong)於(yu)濃(nong)縮樣(yang)品。
(6)自(zi)備(bei)微(wei)生(sheng)物學無菌操(cao)作(zuo)所需常(chang)規用(yong)具、器皿,樣品(pin)采(cai)集無菌、無(wu)ATP的(de)容器、塑料(liao)袋、手(shou)套、鑷子等。